Родился около 640 года на острове Кипр в городе Амафунт, где и жил довольно долго. В юности он получил прекрасное светское образование, которое завершил изучением богословия.
Уже в юности, вероятно ещё живя в родных местах, преподобный Анастасий принял монашество, а затем отправился в Иерусалим, от туда перешёл в Египет и поселился на горе Синай. В то время игуменом монастыря Святой Екатерины был преподобный Иоанн Лествичник, а затем его брат Георгий. После святого Георгия игуменом стал преподобный Анастасий, отчего он и получил именование Синаит.
VII век, в котором жил и трудился преподобный Анастасий Синаит, был веком догматических споров, и в них преподобный Анастасий принимал непосредственное участие. Он предпринял большие миссионерские путешествия по Египту, Палестине, Аравии, возможно Сирии, где своей проповедью активно боролся с монофизитами (особенно с сектой акефалов), монофелитами, северианами, феодосианами и другими еретиками, в том числе и с только появившимися тогда мусульманами, относительно которых преподобный делал в своих трудах заметки о том, как беседовать с ними.
Преподобный Анастасий Синаит всю свою долгую жизнь провел в молитвах и подвижнических трудах. Год его смерти точно неизвестен: около 686 или 700 года или даже в начале VIII века. Достоверно известно лишь то, что он пережил победу Православия над ересью монофелитства, когда её приверженцы были осуждены на Шестом Вселенском соборе (680—681 годы). Последние исследования говорят, что смерть преподобного Анастасия произошла не ранее 701 года.
Многочисленные творения преподобного Анастасия включены в 89-й том Patrologia Graeca.
Довольно часто, по ошибке, преподобный Анастасий Синаит отождествляется с другими Анастасиями, одним из них является Анастасий I Синаит, патриарх Антиохийский.
